跨膜蛋白SEMA4F抗體的生物素化標(biāo)記實驗要點

跨膜蛋白SEMA4F抗體的生物素化標(biāo)記實驗要點:

1. 新型血小板相關(guān)內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體費用 如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;

3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;

5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;

6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;

7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;

8.在細胞的熒光標(biāo)記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導(dǎo)致高本底。

小鼠血管內(nèi)皮抑素(mouse Endostatin)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠腎上腺素(mouse EPI)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠內(nèi)皮細胞一氧化氮合酶(mouse eNOS)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠雌二醇(mouse E2)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠促卵泡素(mouse FSH)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠凋亡相關(guān)因子(mouse Fas)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠凋亡相關(guān)因子配體(mouse Fas Ligand)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠酸性成纖維生長因子(mouse a-FGF)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠堿性成纖維生長因子(mouse b-FGF/FGF-2)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin）作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠Flt3(mouse Flt3)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠Flt3配體(mouse Flt3 Ligand)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠纖維連結(jié)蛋白(mous FN)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠凝血因子X(mouse FX)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠纖維蛋白原(mouse Fibrinogen)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝

小鼠Foxp3(mouse Foxp3)作用:ELISA規(guī)格：48T/96T進口分裝