細(xì)胞凋亡陽(yáng)性對(duì)照試劑盒接種細(xì)胞

細(xì)胞凋亡陽(yáng)性對(duì)照試劑盒接種細(xì)胞

1．按常規(guī)胰酶消化法消化匯合的單層細(xì)胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。

2．200g離心5分鐘收集細(xì)胞沉淀。

3．用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸浮液并計(jì)數(shù)。

4．將細(xì)胞稀釋到2.5×103個(gè)/mL～5×10個(gè)/mL之間(需要根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度決定)，如果不知道生長(zhǎng)數(shù)度，一般可以稀釋到1×10個(gè)/mL。

5．將足夠量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個(gè)96孔板的MTT檢測(cè)需要約20mL的細(xì)胞懸液。

6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細(xì)胞懸液(對(duì)正常細(xì)胞)。如果是腫瘤細(xì)胞，則加入100μL腫瘤細(xì)胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。

?注意：一定要把細(xì)胞加在孔的正中，否則細(xì)胞會(huì)聚集在孔的角落處，影響試驗(yàn)。

7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細(xì)胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對(duì)照(用于測(cè)OD時(shí)調(diào)零)，第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應(yīng)對(duì)第11列反應(yīng)的影響。

8．按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期。