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產(chǎn)品分類(lèi)
IL-7 Elisa Kit 
IL-7 Elisa Kit
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英文名稱(chēng) : Rat Interleukin-7, IL-7 Elisa Kit
貨號 : EY-00R1891
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用途:本試劑盒僅供科研使用,定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中大鼠溶血磷脂酰膽堿(LPC)的含量。

原理:

采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板,制成固相載

體,實(shí)驗時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標準品,并加入 HRP 標記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標儀在 450nm 波長(cháng)測定吸光度(OD 值),根據標準曲線(xiàn),計算測試樣品中 ABP 濃度。

試劑盒組成:

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

陽(yáng)性對照

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被板

12 孔×8 條

9

陰性對照

0.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說(shuō)明書(shū)

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個(gè)

實(shí)驗材料與試劑配制:

1. 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 緩沖液使用:加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。

混勻,靜置1小時(shí)備用(如果標本是血清或者血漿,此步驟忽略)。

3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。

樣品收集、處理及保存:

1. 細胞培養上清:適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104

-106/ml 左右,通過(guò)反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或

者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6. 組織標本:切取組織標本,稱(chēng)取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000

rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過(guò)程中如出現沉淀,應再次離心。血液標

本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解

凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟:

1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。

2. 分組:取出 96 孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準

品組(6 個(gè)濃度)、空白孔、待測樣品組。

注:為減少實(shí)驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。

3. 加樣:依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中加入 50ul

的待測樣本。

4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(空白對照孔除外)。

5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標板 5 次,用吸水紙徹底拍干。

7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止:25-37℃下避光反應 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。

9. 讀板:在 450nm 波長(cháng)讀取各孔的 OD 值。

注意事項:

1. 實(shí)驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

2. 加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免**孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì )導致不同的預孵育時(shí)間,從而影響

實(shí)驗的準確性以及重復性。

3. 孵育:嚴格按照說(shuō)明書(shū)上規定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4. 反應時(shí)間的控制:加入底物后請定時(shí)觀(guān)察反應孔的顏色變化,如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應。

5. 建議實(shí)驗前預測樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應對樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)嬎憬Y果時(shí)乘以相應的稀釋倍數。

6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預實(shí)驗(即先做標準曲線(xiàn),試用幾個(gè)標本),如果對本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購經(jīng)銷(xiāo)商聯(lián)系,

如果因運輸過(guò)程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。

性能

1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結果判斷與分析

1、儀器值:于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線(xiàn),樣品的待測物質(zhì)含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。


買(mǎi)家數量成交時(shí)間
正品保障

確保所有產(chǎn)品都是原裝正品

優(yōu)質(zhì)服務(wù)

優(yōu)質(zhì)服務(wù),售后無(wú)憂(yōu)

安全包裝

統一包裝,保障產(chǎn)品安全運輸

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